4樣品分析方法確證技術要求

4. 1特異性

對於色譜法，至少要考察6個不同個體來源的空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質色譜圖（注明濃度）及用藥後的生物樣品色譜圖，反映分析方法的特異性。對於質譜法，則應著重考察分析過程 中的介質效應。

4. 2標準曲線和定量範圍

根據所測定物質的濃度與響應的相關性，用回歸分析方法獲得標準曲線,提供標準曲線的線性方程和 相關係數。標準曲線高低濃度範圍為定量範圍，必須用至少6個濃度建立標準曲線，應使用與待測樣品相 同的生物介質製備標準曲線，定量範圍要能覆蓋全部待測樣品濃度。建立標準曲線時，應隨行空白生物樣品，但計算時不包括該點。

4.3精密度與準確度

一般要求選擇3個〜5個濃度樣品同時進行方法的精密度和準確度考察。低濃度選擇在定量限附近，其濃度在定量限的3倍以內;高濃度接近於標準曲線的上限；中間選一個濃度。每一濃度每批至少測 定5個樣品，為獲得批間精密度應至少連續測定3個分析批。精密度用質控樣品的批內和批間相對標準差（RSD）表示，RSD一般應小於15%,在最低檢測限附近RSD應小於20%。準確度一般應在85%〜 115%範圍內，在最低檢測限附近應在80%〜120%範圍內。

4.4最低檢測限

一般要求殘留分析方法的最低檢測限（LOD）滿足:MRL>0. 5 mg/kg時,最低檢測限為0.1 mg/kg；當 MRL 在 0. 5 mg/ kg~O. 05 mg/kg 時,最低檢測限為 0.1 mg/ kg〜0. 02 mg/ kg；當 MRL<0. 05 mg/ kg 時，最低檢測限為0.5 MRL。

4.5回收率

一般要求考查高、中、低3個濃度的提取回收率，其結果可重現。

4.6方法學質控

對於未知濃度樣品的測定應在生物樣品分析方法確證完成以後開始。每個未知濃度樣品一般 測定一次，必要時可進行複測。每個分析批生物樣品測定時應建立新的標準曲線，並隨行測定高、 中、低3個濃度的質控樣品。質控樣品測定結果的偏差一般小於20%，每個濃度質控樣品至少雙樣本，並應均勻分布在未知樣品測試順序中。當一個分析批中未知濃度樣品數目較多時，應增加各濃度質控樣品數，使質控樣品數大於未知濃度樣品總數的5%,質控樣品測定的偏差一般應小於15%, 低濃度點偏差一般應小於20%,最多允許1/3不在同一濃度的質控樣品結果超限。如質控樣品測 定結果不符合上述要求，則該分析批樣品測試結果作廢。濃度高於定量上限的樣品，應采用相應的 空白介質稀釋後重新測定。整個分析過程應當遵從預先製定的試驗室標準操作程序以及良好實驗室操作原則。

4. 7微生物學和免疫學分析方法確證技術要求

上述分析方法確證的很多指標和原則也適用於微生物學或免疫學分析，但在方法確證中應考慮到它們的一些特殊之處。微生物學或免疫學分析的標準曲線本質上是非線性的,所以應采用比化學分析更多的濃度點來建立標準曲線。

5藥物代謝動力學曲線的擬合、模型的確定及參數估算

5.1藥時曲線的擬合及模型確定

根據藥物性質和動物特點選擇合適的數據處理軟件,可采用Win Nonlin、Kinetica、3p87 (3p97)、PK- BP-N1、BAPP、MCPKP、DNS等;注明軟件名稱、版本和來源。根據不同時間點所對應的血液等組織樣品 藥物濃度,作藥時曲線圖，釆用最小二乘法擬合出藥物代謝動力學方程，根據血藥濃度與時間的函數關係 確定所屬的模型。

5.2藥物代謝動力學參數的估算

根據試驗中測得的受試動物的血藥濃度-時間數據，求得受試藥物的主要代謝動力學參數。對於靜脈 注射給藥的藥物，應提供消除半衰期t_1/2、表觀分布容積Vd、血藥濃度-時間曲線下麵積AUC、清除率CL 等參數值;對於血管外給藥的藥物，除提供上述參數外，還應提供峰濃度Cmax、達峰時間Tmax等參數值。

文章來源：《水產品獸藥殘留限量及監測方法查詢手冊》

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